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1.HRP的底物　作为供氢体的底物化合物较多，常用的有以下几种：

(1)邻苯二胺(OPD)：OPD被认为是HRP最为敏感的色原底物之一。0PD在HRP的作用下显橙黄色，加强酸如硫酸或盐酸终止反应后呈棕黄色，最大吸收峰在492nm波长。OPD是ELISA中应用最早的底物，但其应用液稳定性差，易变色，需新配制后在1小时内使用，显色反应过程需避光，而且具有致癌性。

(2)四甲基联苯胺(TMB)：TMB是一种优于OPD的新型HRP色原底物。TMB经HRP作用后变为蓝色，加入硫酸终止反应后变为黄色，最大吸收峰波长为450nm。TMB具有稳定性好，成色无需避光，无致突变作用等优点，已成为目前ELISA中应用最广泛的底物。缺点是水溶性差。

(3)其他：5-氨基水杨酸(5-ASA)和2，2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS)也是HRP常用的底物。

2.AP的底物　常用对-硝基苯磷酸脂(p-NPP)，p-NPP经AP作用后的产物为黄色对硝基酚，最大吸收峰波长为405nm。

3. β-半乳糖苷酶(β-Gal)的底物 常用4-甲基伞酮基-R-D半乳糖苷(4-MUU)，酶作用后，生成高强度荧光物4-甲基伞形酮(4-MU)，其敏度性较HRP高30～50倍，但测量时需用荧光计。